組織免疫熒光（IF）---雙標

實驗原理
免疫熒光技術是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查組織內的相應抗原（或抗體）。在組織中形成的抗原抗體復合物上含有標記的熒光素，熒光素受激發光的照射，由低能態進入高能態，而高能態的電子是不穩定的，以輻射光量子的形式釋放能量后，再回到原來的低能態，這時發出明亮的熒光，利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的組織，從而確定抗原或抗體的性質和定位，以及利用定量技術測定含量。免疫熒光技術分直接法、間接法和補體法，最常見的為間接法。

實驗步驟
（1）石蠟切片脫蠟至水，或者制作的冰凍切片用冷丙酮在4℃固定10－20分鐘；
（2）抗原修復，冰凍切片無需修復；
（3）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min；
（4）滴加正常的血清室溫封閉30 min；
（5）加未標記的特異性抗體，4℃過夜；
（6）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min（震蕩漂洗）；
（7）加熒光標記的二抗抗體，37℃濕盒避光作用30 min；
（8） 0.01M PBST避光漂洗3次，每次5 min；
（9）甘油緩沖液封片；
（10）熒光顯微鏡觀察。
 

注意事項

1.需要使用不同來源的一抗

2.熒光有衰減，寄回或者重拍都可能有熒光消失的現象，建議客戶在下單時增加拍照張數。

3.做石蠟包埋樣本保存及運輸：常溫置于4%多聚甲醛固定液內保存及運輸（需注意固定液的量最好是組織的10倍以上，樣本需完全浸泡于固定液內并防止樣本貼壁固定不良，大標本最好使用大的標本瓶/袋運輸，建議在大標本上按取材包埋要求做多條平行切口，以防標本中心固定不透徹。運輸過程中防止固定液滲漏）。
4.做冰凍切片樣本保存及運輸：-80℃或液氮長期保存，干冰運輸。

實驗結果展示

 
 
技術服務與咨詢：027-87735083