模式動物制備
模式動物制備和銷售
華聯科模型動物研究院始終專注于模式動物的基因編輯與模型研發,擁高專業的項目設計團隊以及經驗豐富 、受過嚴格專業培訓 的實驗技術隊伍,建立了穩定而高效的基因工程小鼠研發服務平臺,致力于提供最高標準的基因修飾模型解決方案 。華聯科模型動物研究院提供組織細胞特異性誘導表達的基因敲入 、全敲除及條件性基因敲除小鼠模型構建、小鼠精子胚胎冷凍保存復蘇等技術服務。服務范圍涵蓋國內大多數生物醫藥企業 、院校、科研及醫療機構。
轉基因小鼠制備
由客戶提供轉墓因質粒圖譜、質粒DNA及真相關序列信息,研究院負責質粒鑒定、酶切線性化DNA制備、小鼠受精卵顯微注射 、注射受精卵移植 、移植小鼠孕期觀察飼養、新生小鼠出生記錄及生命維持 、編號及鼠尾基因組DNA抽握、轉基因陽性小鼠的PCR鑒定等。
技術指標:顯微注射用受精卵采自C57BL/ 6J(♀)與CBA(♂)的Fl代;胚胎移植(受精卵輸卵筐移植)受體采用ICR代假孕母鼠;受精卵供體、受體及新生仔鼠均維持在SPF級小鼠飼養環境;獲得轉基因質粒六個月內提供3只以上鼠齡4-6周的轉基因陽性小鼠(雜合子Funder),雌雄不限。
全基因敲除小鼠模型制備
根據客戶的需求進行打靶載體構建,由客戶提供目標基因的Ensembl序列號,并提出擬剔除區域;研究院科研人員設計打靶策略,并反饋客戶,經客戶確認后進行打靶載體的構建及后續研發。研究院承諾提供3只以上陽性小鼠。
技術指標:顯微注射用受精卵采自C57BL/ 6J(♀)與CBA(♂)的Fl代;胚胎移植(受精卵輸卵筐移植)受體采用ICR代假孕母鼠;受精卵供體、受體及新生仔鼠均維持在SPF級小鼠飼養環境;陽性小鼠需通過測序證實待敲基因的序列。
條件性基因敲除或敲入小鼠模型制備
根據客戶的需求進行打靶載體構建,由客戶提供目標基因的Ensembl序列號,并提出擬剔除(或敲入) 區域;研究院科研人員根據客戶的需求確定flox或敲入片段插入的區域,經認可后研究院科研人員設計打靶策略,并反饋客戶,經害戶確認后進行打靶載體的構建及后續研發。研究院承諾提供3只以上陽性小鼠。
技術指標:顯微注射用受精卵采自C57BL/6J(♀)與CBA(♂)的Fl代 ;胚胎移植(受精卵輸卵雷移植)受體采用ICR代假孕母鼠;受精卵供體、受體及新生仔鼠均維持在SPF級小鼠飼養環境。對于基因敲入、flox小鼠各階段均需通過測序證實敲入基因的存在和序列正確。
原核/胞質注射
原核
原核/胞質注射可以用于對mRNA、普通小片段及大片段DNA、BAC(Bacterial Artificial Chromosome,細菌人工染色體)進行注射、以及相關DNA混合共注射。
囊胚注射
囊胚注射是用于對已打靶好的ES細胞進行囊胚注射,目的是為了得到嵌合率較高的小鼠,而且要求被注射進入的ES細胞能發育成生殖細胞。
由客戶提供待注射物品,研究院負責小鼠胚胎的顯微注射、胚胎移植、移植小鼠孕期觀察飼養、嵌合體小鼠出生記錄、生命維持等。
技術指標:顯微注射用胚胎取自C57BL/6J或ICR(由客戶選擇);胚胎移植(受精卵子宮內移植)受體采用ICR代假孕母鼠;胚胎供體受體及新生仔鼠均維持在SPF級小鼠飼養環境。
凈化
外來的小鼠進入本中心前需進行隔離檢疫,報告顯示有污染的動物進入SPF級設施需要通過生物凈化,以防止未知的微生物、病原體及小鼠傳染病所帶來的風險。
供鼠要求:
1.健康雄鼠1-2只,3-6 月齡(超齡可以嘗試),品系背景明確。我們可提供提供野生型小鼠凈化。
2.健康雄鼠1-2只,3-6 月齡(超齡可以嘗試),同品系雌鼠4-8周齡,5只以上。
擴繁
什么是快速擴繁?
我們說的快速繁育就是指使用極少數的雄鼠來獲得大量同一周齡子代小鼠。
快速擴繁的原理是什么?
快速擴繁可以根據實驗者的需求得到更多的陽性鼠,以期快速擴大繁育規模,或者采用二次快速擴繁,整個過程不采用自然交配,只使用體外受精和胚胎移植技術。
快速擴繁=超數排卵+體外受精+胚胎移植
體外受精IVF|(in vitro fertilization)
采用體外培養的方式,將激活后的精子與卵母細胞進行體外受精并移植入假孕母鼠體內,獲得子代小鼠。
備注:小鼠的精子取自附睪尾。
優點:
1.體外受精技術相當于雄鼠和大量的雌鼠在體外同時交配,這保證了出生小鼠周齡的一致性,降低了由于小鼠周齡差異導致的實驗誤差,實驗數據更可靠。
2.體外受精技術還可以充分節省時間,通常雌鼠需要到6周性成熟才可自然交配,而超排的雌鼠只需4周即可;另外一般自然繁育一代的周期為 3 個月,而 IVF 僅需 1.5 個月!
3.體外受精是一項輔助生殖技術,如果只剩下體外無法正常生育的雄鼠,不要忘了體外受精,不但可以繼續生崽,還可以生多多。
單精子胞漿注射 ICSI( intracytoplasmic sperm injection)
使用顯微操作技術將一個精子直接注射到卵細胞胞漿內,使卵子受精從而獲得胚胎。主要適用于精子活力低,排精量少,難以讓母鼠受孕。
胚胎移植技術(embryo transfer)
將小鼠早期胚胎移植到假孕母鼠輸卵管或子宮內使之繼續發育為新個體的技術。其實就是相當于“借腹生子”。
優點:
1.由于移植的ICR受體都是SPF級別,所以出生的小仔相當于做了一次凈化,新生小鼠的身體素質超贊。
2.胚胎移植的是1.5 dpc 的胚胎,根據小鼠的妊娠周期,可以推算新生鼠的準確出生日期,一般加上19就是受體生崽日期。這對于那些做不同日齡小鼠相關實驗的課題非常有優勢。
保種
模型小鼠胚胎凍存保種
由客戶提供轉基因或基因敲除雄鼠,研究院負責將該小鼠與超排的C57BL/6J交配,取桑惺胚階段的胚胎,并采用玻璃化冷凍的方法進行胚胎凍存,保存在液氮中。
客戶提供5-10只6-8周齡雄鼠(轉基因陽性鼠或基因敲除雜臺子/純臺子雄鼠),并提供基因修飾鼠基因型鑒定的引物及條件;研究院負責小鼠基因型復檢(PCR方法),將超排后的4-6周齡C57BL/6J雌鼠與基因修飾雄鼠交配,取桑惺胚階段的胚胎,每個國系凍存200枚桑惺胚階段的胚胎。
小鼠胚胎操作及品系建立
本研究院還可進行小鼠卵子、精子和胚胎的采集、凍存和復蘇;并可進行體外受精、顯微受精、克隆、胚胎生物凈化、小鼠嵌合胚胎的制備和四倍體胚胎拯救等技術服務。收費標準視具體情況而定。
凍存小鼠胚胎復蘇繁殖
冷凍保存的胚胎由害戶運至研究院(液氮中運輸),研究院按照客戶提供的凍存及復蘇方法,復蘇胚胎,并將胚胎移植到假孕母鼠體內(輸卵雷移植或子宮移植),仔鼠出生記錄及基因型鑒定等。
技術指標:胚胎復蘇并將胚胎移植到假孕母鼠ICR的子富(每側移植6枚囊胚)內,受體鼠及新生鼠均維持在SPF級小鼠飼養環境中。研究院保存的胚胎復蘇后,提供5只以上SPF級轉基因陽性鼠或基因剔除雜合子小鼠,雌雄不限;客戶提供的冷凍胚胎復蘇移植后,所高出生的仔鼠均提供給客戶。
模式動物定制流程
常用轉基因及基因剔除小鼠目錄
模型分類 | 標準化模型名稱 |
自身免疫缺陷 | 系統性紅斑狼瘡模型 |
免疫炎癥、紅斑狼瘡研究 | |
淋巴結病、全身性自體免疫 | |
代謝類疾病小鼠模型 | Ⅰ型糖尿病小鼠模型 |
Ⅱ型糖尿病小鼠模型 | |
高血壓、高膽固醇、動脈粥樣硬化小鼠模型 | 高血壓模型 |
動脈粥樣硬化模型 | |
膽固醇代謝相關研究 | |
老年癡呆、帕金森綜合癥小鼠模型 | 雙轉基因老年癡呆(AD)模型 |
老年癡呆(AD)模型 | |
帕金森綜合癥(PD)模型 | |
神經退化,阿爾茨海默?。?span class="font3">AD) | |
腫瘤小鼠模型 | 腸道腫瘤 |
淋巴瘤,骨肉瘤 | |
腦腫瘤 |